色譜(pǔ)柱的(dí)填料(liào)和流(liú)動相的組分應按各(gè)品種(zhǒng)項下(xià)的規(guī)定.常(cháng)用的色譜(pǔ)柱填料有矽膠(jiāo)和化學鍵合(hé)矽(guī)膠(jiāo)。後者以(yǐ)十(shí)八(bā)烷基(jī)矽烷鍵(jiàn)合矽膠很常用(yòng)辛(xīn)基鍵(jiàn)合(hé)矽膠次之，氰基或氨基鍵(jiàn)合(hé)矽膠也有使用(yòng)；離子交(jiāo)換填料(liào)用於離子(zǐ)交(jiāo)換色譜(pǔ)；凝(níng)膠(jiāo)或玻璃微球等，用於分子(zǐ)排阻色譜等(děng)。注樣(yàng)量(liáng)一(yī)般為數微升。除(chú)另(lìng)有(yǒu)規(guī)定外(wài)，柱(zhù)溫為室溫(wēn)，檢測(cè)器(qì)為紫(zǐ)外(wài)吸(xī)收(shōu)檢(jiǎn)測(cè)器(qì)。
1.在(zài)用(yòng)紫外(wài)吸(xī)收檢測(cè)器時(shí)，所用(yòng)流(liú)動(dòng)相(xiāng)應(yīng)符合(hé)紫外(wài)分(fēn)光光度法項下對(duì)溶劑的要求(qiú)。
正文(wén)中(zhōng)各品(pǐn)種項(xiàng)下(xià)規(guī)定的條(tiáo)件(jiàn)除(chú)固(gù)定相(xiāng)種類，流(liú)動(dòng)相組分，檢測器類(lèi)型不(bù)得(dé)任意改(gǎi)變(biàn)外，其(qí)餘(yú)如(rú)色譜(pǔ)柱內徑，長(cháng)度(dù)，固(gù)定相牌(pái)號，載(zǎi)體粒度，流(liú)動相(xiāng)流(liú)速，混(hùn)合流(liú)動相各組分的比(bǐ)例，柱(zhù)溫，進樣(yàng)量，檢測器的靈敏(mǐn)度(dù)等(děng)，均可適(shì)當改變以適應具體品種並達(dá)到(dào)係(xì)統適用(yòng)性試(shì)驗的(dí)要(yào)求。一般(bān)色譜圖約於(yú)20分鐘(zhōng)內記錄(lù)完畢。
2.係統適用性(xìng)試驗
按(àn)各(gè)品種(zhǒng)項下要求對儀器(qì)進(jìn)行適用性試(shì)驗(yàn)，即(jí)用規定的對(duì)照(zhào)品(pǐn)對(duì)儀(yí)器進(jìn)行試驗(yàn)和調整，應達(dá)到規定的(dí)要求；或(huò)規定分析(xī)狀態下(xià)色譜柱(zhù)的小(xiǎo)理論(lùn)板數(shù)，分(fēn)離度(dù)和拖尾(wěi)因子(zǐ).
色譜柱(zhù)的理論(lùn)板(bǎn)數 在(zài)選定(dìng)的(dí)條件下(xià)，注入供(gōng)試(shì)品溶(róng)液(yè)或(huò)各(gè)品種項(xiàng)下(xià)規定的內標物(wù)質(zhì)溶液，記錄(lù)色譜圖，量出供(gōng)試品(pǐn)主成(chéng)分或內標物質峰(fēng)的保(bǎo)留時間t(R)和(hé)半高峰(fēng)寬W(h/2)，按(àn)n=5.54[t(R)╱W(h/2)]^2計算(suàn)色譜(pǔ)柱的理(lǐ)論(lùn)板數，如(rú)果測得理論(lùn)板數低於各品種項下規(guī)定的小理論(lùn)板數，應改變(biàn)色(sè)譜(pǔ)柱(zhù)的某些條件(如柱長(cháng)，載(zǎi)體性能，色(sè)譜(pǔ)柱(zhù)充填的優(yōu)劣(liè)等(děng))，使(shǐ)理(lǐ)論板數(shù)達(dá)到要求(qiú)。
分離(lí)度 定(dìng)量(liáng)分析(xī)時，為便(biàn)於(yú)準確(què)測量(liáng)，要求(qiú)定量(liáng)峰與(yǔ)其(qí)他(tā)峰(fēng)或(huò)內標峰之間(jiān)有(yǒu)較好(hǎo)的分(fēn)離(lí)度。分離(lí)度(R)的(dí)計(jì)算(suàn)公式為：R=2(tR2-tR1)/(W1+W2)， 式中 t(R2)為(wéi)相(xiāng)鄰兩峰中後一峰(fēng)的保(bǎo)留時間(jiān)； t(R1)為(wéi)相鄰兩(liǎng)峰(fēng)中(zhōng)前(qián)一峰的(dí)保(bǎo)留時(shí)間； W1及(jí)W2為此相(xiāng)鄰兩峰(fēng)的峰(fēng)寬。除另外有規(guī)定(dìng)外(wài)，分(fēn)離(lí)度應(yīng)大(dà)於1.5。
拖尾因子(zǐ)
為保(bǎo)證(zhèng)測(cè)量(liáng)精度(dù)，特別(bié)當采用(yòng)峰(fēng)高(gāo)法(fǎ)測量時，應檢(jiǎn)查待測峰的(dí)拖尾(wěi)因子(T)是否(fǒu)符(fú)合各(gè)品(pǐn)種項下(xià)的規定或(huò)不同(tóng)濃(nóng)度(dù)進(jìn)樣(yàng)的(dí)校(xiào)正因子(zǐ)誤(wù)差(chà)是否符合要求。拖(tuō)尾(wěi)因(yīn)子(zǐ)計算(suàn)公(gōng)式為：
W(0.05h) T=-2d1 式(shì)中 W(0.05h)為0.05峰(fēng)高(gāo)處的(dí)峰寬；
d1為(wéi)峰(fēng)至大至(zhì)峰(fēng)前沿(yán)之(zhī)間的距(jù)離(lí)。除另有規定外(wài),T應(yīng)在0.95～1.05間。
也可(kě)按各品種校(xiào)正(zhèng)因子測(cè)定項下，配製相當於80%，100%和120%的對照(zhào)品(pǐn)溶液，加入規定量(liáng)的內(nèi)標(biāo)溶液，配成三種不(bù)同濃度的(dí)溶液，分別(bié)注(zhù)樣(yàng)3次(cì)，計(jì)算(suàn)平(píng)均校(xiào)正(zhèng)因子，其(qí)相(xiāng)對標準偏差應不(bù)大(dà)於(yú)2.0%。
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