1.1復(fù)色光對比耳定(dìng)律(lǜ)的偏(piān)離(lí)

比耳(ěr)定(dìng)律成(chéng)立的(dí)前提條(tiáo)件(jiàn)是人(rén)射(shè)光是(shì)單(dān)色光，但是精度(dù)再高的(dí)儀器(qì)，即(jí)使是(shì)雙單色(sè)器(qì)的(dí)分光光(guāng)度(dù)計(jì)，也(yě)隻(zhī)能獲得近乎單色(sè)的光(guāng)，無法獲得(dé)純(chún)單(dān)色光，它(tā)仍然含(hán)有(yǒu)狹(xiá)窄光通帶，具(jù)有復色光的(dí)性質(zhì)
。而復(fù)色光(guāng)會(huì)導致比耳定(dìng)律的(dí)正或(huò)負(fù)偏離(lí)
。

固定狹縫(féng)的紫外分光光度計光譜帶寬一(yī)般為(wéi)1nm或2nm，可(kě)調(tiáo)狹縫的(dí)可以做到0.Inm；可(kě)見(jiàn)分光光度(dù)計帶寬6nm，snm，甚至(zhì)十(shí)幾納米(mǐ)
。

光譜帶(dài)寬應(yīng)該(gāi)是越小(xiǎo)越好，但是(shì)隨著光(guāng)譜(pǔ)分辨率(shuài)的提高，儀器的(dí)靈(líng)敏度(dù)降低(dī)，所以選擇(zé)儀器(qì)時要綜合(hé)考(kǎo)慮各種(zhǒng)條件(jiàn)的(dí)影響
。當(dāng)溶液(yè)濃度(dù)較小且單色光(guāng)較(jiào)純時(shí)，可(kě)近似認為符合(hé)比耳(ěr)定律
。

1.2雜散光的影響

雜散(sàn)光是指進人檢測器(qì)的(dí)處於(yú)待測波長光譜帶寬範(fàn)圍外(wài)的(dí)其(qí)他波長(cháng)組(zǔ)分(fēn)，它是(shì)光譜測(cè)量中誤差(chà)的(dí)主要來源(yuán)
。

產(chǎn)生(shēng)原(yuán)因有(yǒu):分光光度(dù)計(jì)的色(sè)散元(yuán)件(jiàn)，反(fǎn)射(shè)鏡(jìng)，透鏡及單(dān)色器內(nèi)壁灰(huī)塵(chén)等
。在分(fēn)光(guāng)光(guāng)度(dù)計工(gōng)作波(bō)段邊(biān)緣波(bō)長處(chǔ)，由於(yú)單色(sè)器(qì)透光率，光(guāng)源輻射強(qiáng)度，檢測(cè)器(qì)靈(líng)敏度都較低，雜散(sàn)光(guāng)的(dí)影(yǐng)響更(gēng)為(wéi)顯(xiǎn)著
。

雜散(sàn)光(guāng)限(xiàn)製儀(yí)器的(dí)分析上限可引(yǐn)起嚴(yán)重(zhòng)的測量誤差，實際(jì)工作中(zhōng)，在(zài)定量分(fēn)析時(shí)，一般在(zài)吸(xī)收(shōu)峰或其(qí)附近處測量樣品(pǐn)吸光(guāng)度，如果(guǒ)在(zài)分析波長(cháng)處含(hán)有(yǒu)雜散(sàn)光(guāng)，這時樣品(pǐn)的(dí)透(tòu)光率(shuài)較(jiào)小，而(ér)雜(zá)散(sàn)光(guāng)大部分透過，使(shǐ)測量吸(xī)光度(dù)低於真實吸光(guāng)度
。

1.3儀器噪(zào)聲(shēng)對測(cè)t的影(yǐng)響

儀器(qì)噪(zào)聲也是儀器的(dí)一(yī)個(gè)重要指標，它(tā)表(biǎo)征儀器做(zuò)稀(xī)溶液的能(néng)力(lì)
。是(shì)疊加在待測(cè)量的分(fēn)析(xī)信號中的不需要(yào)的信號，掃(sǎo)描100%T和(hé)0%T綫，可觀察到(dào)分光(guāng)光度計(jì)的噪聲(shēng)水平(píng)，如果儀器(qì)噪聲(shēng)較大(dà)，會掩(yǎn)蓋較小(xiǎo)的測量信號，一般用噪(zào)音(yīn)的(dí)二倍來表(biǎo)示儀(yí)器(qì)的(dí)靈敏(mǐn)度
。

1.4波(bō)長和(hé)吸(xī)光度準(zhǔn)確度

樣品(pǐn)的(dí)每一個值(zhí)都是(shì)在(zài)一(yī)定的波長下(xià)測得的(dí)，如果波長誤(wù)差很(hěn)大，測出(chū)的值(zhí)肯定(dìng)不準
。吸光(guāng)度準確度(dù)也(yě)是用戶(hù)對儀器的(dí)直接要(yào)求，更應(yīng)引起足(zú)夠(gòu)的(dí)重(zhòng)視
。

國(guó)家計量檢定(dìng)規程規定(dìng)雙(shuāng)光(guāng)束紫(zǐ)外(wài)可見分(fēn)光光度計(jì)透射比準(zhǔn)確度為*士0.6%， B級土(tǔ)1.0%
。

2測(cè)量條(tiáo)件(jiàn)的選(xuǎn)擇

2.1參比溶液和(hé)溶(róng)荊(jīng)的(dí)選擇

分光(guāng)光(guāng)度(dù)計的測(cè)量實(shí)際上是以通(tōng)過參比(bǐ)池的(dí)光強(qiáng)度作(zuò)為人(rén)射光(guāng)強(qiáng)度(dù)來(lái)測(cè)定(dìng)試樣的(dí)吸光(guāng)度，先調(tiáo)節儀(yí)器使透過參(cān)比(bǐ)池(chí)溶(róng)液的吸光度(dù)為零，然後讓(ràng)同(tóng)一束(shù)光通過樣品，使(shǐ)得(dé)吸光(guāng)度比(bǐ)較(jiào)真實地反映待測(cè)物質的濃度(dù)，所以(yǐ)參比溶液的選擇(zé)非(fēi)常重要
。

如果僅(jǐn)有(yǒu)待(dài)測物質(zhì)與(yǔ)顯(xiǎn)色劑(jì)的(dí)反應產物有吸收，可(kě)用純溶(róng)劑(jì)或(huò)蒸(zhēng)餾水(shuǐ)作參比(bǐ)溶液(yè)
。如(rú)果顯色劑有顏(yán)色，並(bìng)在測(cè)定波長下有吸收，則用顯色(sè)劑溶液(yè)作(zuò)參比(bǐ)溶液(yè)，所加人(rén)顯(xiǎn)色劑及其它試(shì)劑(jì)的量，與試樣中的加(jiā)入(rù)量應一致(zhì)
。

如果(guǒ)樣品(pǐn)中(zhōng)其(qí)它(tā)組分本(běn)身(shēn)的(dí)顏(yán)色對測定(dìng)有(yǒu)幹(gān)擾(rǎo)，而所用(yòng)顯(xiǎn)色(sè)劑沒顏(yán)色，則用不(bù)加(jiā)顯(xiǎn)色劑的樣品溶液作參比液
。

正(zhèng)確(què)選擇(zé)合適的(dí)溶劑，對(duì)提高(gāo)分析的準確度(dù)起重(zhòng)要(yào)作(zuò)用(yòng)
。為減小溶劑(jì)中(zhōng)雜(zá)質(zhì)的影(yǐng)響(xiǎng)，應(yīng)選(xuǎn)擇高純(chún)度的溶(róng)劑(jì)；溶(róng)劑(jì)應不與(yǔ)待測物(wù)質發生化學(xué)反應(yīng)；待測物(wù)在(zài)溶劑(jì)中(zhōng)要有一定(dìng)的溶解(jiě)度(dù)；在(zài)測(cè)定的波長範圍內，溶劑(jì)本(běn)身沒有(yǒu)吸收，注意常用(yòng)溶(róng)劑(jì)的zui短(duǎn)可用波(bō)長；當用揮發(fā)性(xìng)大的溶劑時，測量過程(chéng)中(zhōng)吸收池應加(jiā)蓋
。

2.2測(cè)試(shì)波(bō)長的選(xuǎn)擇

當用(yòng)分光光度計(jì)對(duì)溶液(yè)進行測定(dìng)時(shí)，首(shǒu)先需(xū)要(yào)選擇(zé)合適的(dí)測量(liáng)波(bō)長
。選擇的(dí)依據是該被測(cè)溶液(yè)的(dí)吸(xī)收(shōu)曲(qū)綫
。在(zài)一(yī)般情(qíng)況下，我們總(zǒng)是選(xuǎn)擇(zé)zui大吸收(shōu)波長作(zuò)為測量(liáng)波(bō)長，這樣可(kě)以提(tí)高靈(líng)敏度
。

而(ér)在有些(xiē)情況(kuàng)下zui大吸收峰很尖(jiān)銳，吸(xī)收(shōu)過大或(huò)附近有(yǒu)幹擾存在，就不能選(xuǎn)zui大吸收波長，而必須在保證有(yǒu)一定靈敏度的情況(kuàng)下，選擇吸(xī)收曲綫中(zhōng)的(dí)其它波(bō)長進行測定(dìng)(曲綫較平坦(tǎn)處對(duì)應的(dí)波長(cháng))，以(yǐ)消除幹(gān)擾
。繪製吸(xī)收(shōu)曲(qū)綫是(shì)正確選擇波長的(dí)有效手(shǒu)段(duàn)和方(fāng)法(fǎ)
。

3，分光光度計(jì)的(dí)檢(jiǎn)驗小(xiǎo)妙(miào)招

波(bō)長準(zhǔn)確(què)度的檢(jiǎn)驗

分(fēn)光光(guāng)度(dù)計在使(shǐ)用(yòng)過(guò)程中，由(yóu)於機(jī)械(xiè)振(zhèn)動，溫(wēn)度變(biàn)化(huà)，燈(dēng)絲變形，燈(dēng)座(zuò)鬆動(dòng)或更換燈(dēng)泡(pào)等原(yuán)因(yīn)，經常會出(chū)現刻度盤上(shàng)的讀(dú)數與(yǔ)實際(jì)通(tōng)過溶(róng)液的(dí)波長不(bù)符合的現(xiàn)象，因而(ér)導致(zhì)儀器(qì)靈(líng)明(míng)度降低，影響(xiǎng)測(cè)定(dìng)結(jié)果的精(jīng)度(dù)，需要進行(háng)檢(jiǎn)驗
。

檢(jiǎn)驗波長準確度(dù)zui簡單(dān)的(dí)方法是(shì)用(yòng)幹涉(shè)濾(lǜ)光(guāng)片(piàn)或鐠(pǔ)釹濾(lǜ)光片(piàn)測(cè)量儀器(qì)的(dí)吸收峰值, 如果測(cè)出的(dí)值與(yǔ)濾(lǜ)光(guāng)片標準(zhǔn)值之(zhī)差超出(chū)規程規定(dìng), 則(zé)需要(yào)進行(háng)波(bō)長(cháng)調(tiáo)節
。

透射(shè)比正確度(dù)的(dí)檢驗(yàn)

用透(tòu)射比標(biāo)準(zhǔn)值分(fēn)別為(wéi)10 %，20 %，30 %左右(yòu)的光譜中性濾光片(piàn)，可見光區分別在440，546，635nm波長處(chǔ)，以(yǐ)空氣(qì)為參比(bǐ)，分別測(cè)量(liáng)各濾(lǜ)光(guāng)片(piàn)的透射(shè)比(bǐ)，紫外(wài)光(guāng)區用(yòng)重(zhòng)鉻酸鉀(jiǎ)溶液分別在235，257，313，350nm波長處(chǔ)，以(yǐ)高氯酸溶液(yè)為參(cān)比，測量其(qí)透射比
。

穩定度(dù)的檢驗

在零點不受(shòu)光(guāng)的條件(jiàn)下，用(yòng)零(líng)點調(tiáo)節器將(jiāng)儀器(qì)調至零(líng)點，觀(guān)察(chá)3分(fēn)鐘讀取透射比的變化，即為零點穩(wěn)定性
。在儀器(qì)測量範(fàn)圍(wéi)兩端(duān)向(xiàng)中(zhōng)間靠(kào)10nm處(chǔ)，調節零點後，蓋(gài)上樣(yàng)品(pǐn)室蓋(打開光(guāng)門(mén))，使光電管受(shòu)光(guāng)，調節(jié)透(tòu)射(shè)比為95%（數顯儀(yí)器調至100%）察(chá)3分鐘(zhōng)讀取透射(shè)比(bǐ)的變化，為光電流穩(wěn)定(dìng)性(xìng)
。 

光的檢(jiǎn)驗

可見(jiàn)分(fēn)光計棱鏡(jìng)式儀器(qì)在(zài)420nm處，光柵式儀(yí)器(qì)在360nm處(chǔ)，紫(zǐ)外分光(guāng)計在(zài)220nm處(chǔ)分(fēn)別用符合(hé)規(guī)定(dìng)的截(jié)止濾(lǜ)光片(piàn)，以(yǐ)空氣(qì)為參比，測量其透射比值(zhí)，即(jí)為儀(yí)器在相(xiāng)應波長下的雜散輻射率
。